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技術(shù)文章

膠原檢測試劑盒的產(chǎn)品特點及實驗步驟

技術(shù)文章
   膠原檢測試劑盒采用與膠原特異性結(jié)合的Sircol染料,主要用于定量檢測哺乳動物組織中抽提的酸溶性膠原和體外培養(yǎng)哺乳動物細胞釋放到培養(yǎng)基中的膠原。
  溶于酸、胃蛋白等的可溶性膠原均可檢測,具體可檢測的膠原類型為I-V型,VI-XIV型膠原也可檢測,但由于難以制備標準曲線,還無法定量。Sircol染料不能區(qū)分不同類型的膠原,但可與膠原的[Gly-X-Y]n螺旋結(jié)構(gòu)特異性地結(jié)合。隨著膠原變性為凝膠,該染料與膠原的結(jié)合力減弱。非脊椎動物與膠原由于變性溫度較低、羥脯氨酸殘基較少等原因,結(jié)合染料的能力較弱,需要制備種屬特異性的純化標準品,以繪制標準曲線。
  膠原檢測試劑盒的實驗步驟
  1.繪制標準曲線
  2.待測樣本的制備:取50ul樣本容易調(diào)整體積到100ul進行反應(yīng)。根據(jù)反應(yīng)的結(jié)果對樣本濃度進行調(diào)整,使其在標準曲線范圍內(nèi);
  3.膠原—染料復(fù)合物的獲得:加入1ml Sircol染料,混勻離心后,既得膠原—染料復(fù)合物,棄 上清,去掉未結(jié)合的染料
  4.加入1ml 染料釋放劑,將膠原—染料復(fù)合物中的染料釋放出來
  5.吸光度測定:用分光光度計540nm出定量測定。或使用colorimeter測定
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